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发信人: simaler (鬼笔天阁), 信区: CST
标 题: 考试专题
发信站: BBS 荔园晨风站 (Tue Dec 5 17:47:48 2000), 转信
蛋白质的分离纯化
一、 沉淀法
沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结
构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。
1、盐析法
盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当
盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中
和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。
2、有机溶剂沉淀法
有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用
；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。
3、蛋白质沉淀剂
蛋白质沉淀剂则仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝
集素和重金属等。
4、聚乙二醇沉淀作用
聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用
。
5、选择性沉淀法
根据各种蛋白质在不同物理化学因子作用下稳定性不同的特点，用适当的选择
性沉淀法，即可使杂蛋白变性沉淀，而欲分离的有效成分则存在于溶液中，从而达
到纯化有效成分的目的。
二、 吸附层析
1、 吸附柱层析
吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱
的一种层析方法。
2、 薄层层析
薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动
相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后
按纸层析操作进行展层。
3、 聚酰胺薄膜层析
聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢
键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与
被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜
表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分
离目的。
三、 离子交换层析
离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离
子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子
化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离
子或离子化合物的吸附作用进行。`
四、 凝胶过滤
凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其
内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液
中的物质就按不同分子量筛分开了。
五、 亲和层析
亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反
应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，
特异的废物（S'）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（E－S'）一样。在亲和
层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而
亲和层析与酶一底物反应不同的是，前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存
在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体
L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以共价键的方式固化到含有活
化基团的基质M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体
。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人小层析柱
（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体
有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附
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